অন্যান্য স্থানান্তর (ব্লটিং) প্রযুক্তি, যেমন ওয়েস্টার্ন ব্লটিং, নর্দার্ন ব্লটিং, সাউদার্ন ব্লটিং, অনুরূপ পদ্ধতি ব্যবহার করে, কিন্তু একটি নমুনায় আরএনএ বা প্রোটিন সনাক্ত করতে এবং দক্ষিণের উদ্ভাবিত পদ্ধতির নামে নামকরণ করা হয়েছে। যেহেতু সাউদার্ন ব্লট বিজ্ঞানীর নামে নামকরণ করা হয়েছে, তাই শব্দটি বড় হাতের অক্ষর দিয়ে লেখা হয়েছে, যখন পশ্চিমী ব্লট এবং নর্দার্ন ব্লট ছোট হাতের অক্ষর দিয়ে লেখা হয়েছে।

পদ্ধতি

1. নিষেধাজ্ঞা এন্ডোনিউক্লিস উচ্চ আণবিক ওজনের ডিএনএকে ছোট ছোট টুকরোতে কেটে দেয়।
2. ডিএনএ খণ্ডগুলি দৈর্ঘ্য বিভাজনের জন্য একটি অ্যাগারোজ জেলে ইলেক্ট্রোফোরসড হয়।
3. যদি কিছু ডিএনএ টুকরো 15 কেবি-এর বেশি হয়, তবে স্থানান্তর করার আগে জেলটি চিকিত্সা করা হয়, উদাহরণস্বরূপ, হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড দিয়ে, যা ডিএনএ-র বিশুদ্ধতা ঘটায় এবং ঝিল্লিতে স্থানান্তরকে সহজ করে।
4. ক্ষারীয় স্থানান্তর পদ্ধতি ব্যবহার করার সময়, অ্যাগারোজ জেলটি একটি ক্ষারীয় দ্রবণে স্থাপন করা হয়, যা ডিএনএ ডাবল হেলিক্সকে ডিনেচার করে এবং আরও হাইব্রিডাইজেশনের জন্য ইতিবাচক চার্জযুক্ত ঝিল্লির সাথে নেতিবাচক চার্জযুক্ত ডিএনএকে আবদ্ধ করতে সহায়তা করে। এই ক্ষেত্রে, অবশিষ্ট আরএনএও ধ্বংস হয়ে যায়।
5. অ্যাগারোজ জেলের উপরে বা নীচে নাইট্রোসেলুলোজ (বা নাইলন) ঝিল্লির একটি শীট স্থাপন করা হয়। চাপ সরাসরি জেলে বা কাগজের বিভিন্ন স্তরের মাধ্যমে প্রয়োগ করা হয়। সফল স্থানান্তরের জন্য, জেল এবং ঝিল্লির মধ্যে আঁটসাঁট যোগাযোগ প্রয়োজন। বাফারটি কৈশিক বাহিনী দ্বারা উচ্চ জলের কন্টেন্ট এলাকা থেকে কম জলের কন্টেন্ট (ঝিল্লি) এলাকায় পরিবহন করা হয়। এতে জেল থেকে ঝিল্লিতে ডিএনএ স্থানান্তর করা হয়। পলিনিওনিক ডিএনএ আয়ন বিনিময় মিথস্ক্রিয়া মাধ্যমে ধনাত্মক চার্জযুক্ত ঝিল্লির সাথে আবদ্ধ হয়।
6. শেষ পর্যন্ত ঝিল্লিতে ডিএনএ ঠিক করার জন্য, পরেরটি শূন্যে 80 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় দুই ঘণ্টার জন্য উত্তপ্ত করা হয় বা অতিবেগুনী বিকিরণ (নাইলন ঝিল্লির ক্ষেত্রে) দ্বারা আলোকিত করা হয়।
7. একটি পরিচিত ডিএনএ ক্রম সহ একটি তেজস্ক্রিয়ভাবে (ফ্লুরোসেন্টলি) লেবেলযুক্ত নমুনার হাইব্রিডাইজেশন একটি ঝিল্লির সাহায্যে করা হয়।
8. হাইব্রিডাইজেশনের পরে, অতিরিক্ত নমুনা ঝিল্লি থেকে ধুয়ে ফেলা হয় এবং হাইব্রিডাইজেশন পণ্যগুলি অটোরেডিওগ্রাফির মাধ্যমে কল্পনা করা হয় (একটি তেজস্ক্রিয় নমুনার ক্ষেত্রে) বা ঝিল্লির রঙ মূল্যায়ন করা হয় (ক্রোমোজেনিক স্টেনিংয়ের ক্ষেত্রে)।

ফলাফল

মেমব্রেনে স্থির একটি নির্দিষ্ট ডিএনএ অঞ্চলের সাথে একটি নমুনার হাইব্রিডাইজেশন নমুনায় বিশ্লেষিত নিউক্লিওটাইড অনুক্রমের উপস্থিতি নির্দেশ করে।

আবেদন

সাউদার্ন ব্লটিং, যা জিনোমিক ডিএনএ দ্বারা সঞ্চালিত হয় যা সীমাবদ্ধ এন্ডোনিউক্লিজের সাথে চিকিত্সা করা হয়, তা নির্ধারণ করতে ব্যবহার করা যেতে পারে জিন কপি নম্বরজিনোমে একটি প্রোব যা শুধুমাত্র একটি একক ডিএনএ খণ্ডে হাইব্রিডাইজ করে যা সীমাবদ্ধ এনজাইম দ্বারা কাটা হয় নি একটি দক্ষিণী দাগে একটি একক ব্যান্ড তৈরি করবে, যখন ব্লটের একাধিক ব্যান্ড নির্দেশ করে যে প্রোবটি একাধিক অভিন্ন ক্রমগুলিতে সংকরিত হয়েছে। হাইব্রিডাইজেশন অবস্থার পরিবর্তন (তাপমাত্রা বৃদ্ধি যেখানে হাইব্রিডাইজেশন করা হয়, লবণের ঘনত্বের পরিবর্তন) নির্দিষ্টতা বৃদ্ধি এবং সংকরকরণে হ্রাসের দিকে নিয়ে যায় কাছাকাছি, কিন্তু অভিন্ন নয়, ক্রম।

"দক্ষিণ দাগ" নিবন্ধটি সম্পর্কে একটি পর্যালোচনা লিখুন

নোট

এছাড়াও দেখুন

আলফা হেলিক্স

এটি বায়োকেমিস্ট্রি সম্পর্কিত একটি খসড়া নিবন্ধ। আপনি এটি যোগ করে প্রকল্প সাহায্য করতে পারেন.

একটি উদ্ধৃতাংশ একটি দক্ষিণী দাগ চিহ্নিত করে৷

- অমরত্ব, প্রিয়... শুধু অমরত্ব. কিন্তু, দুর্ভাগ্যবশত, তিনি বুঝতে পারেন না যে কেউ এটি চায় বলে এটি দেওয়া হয় না। এটি দেওয়া হয় যখন একজন ব্যক্তি এটির মূল্যবান হয়, যখন তিনি জানেন যে অন্যকে যা দেওয়া হয় না, এবং এটি অন্য, যোগ্য লোকদের উপকারের জন্য ব্যবহার করে... যখন পৃথিবী ভাল হয়ে যায় কারণ এই ব্যক্তি এতে বাস করে।
- কেন তার দরকার, মা? সর্বোপরি, অমরত্ব হল যখন একজন ব্যক্তিকে দীর্ঘকাল বেঁচে থাকতে হবে? এবং এটি খুব কঠিন, তাই না? এমনকি আমার নিজের জন্যও সংক্ষিপ্ত জীবনপ্রত্যেকেই অনেক ভুল করে, যা সে তখন প্রায়শ্চিত্ত করার বা সংশোধন করার চেষ্টা করে, কিন্তু পারে না... কেন সে মনে করে যে তাকে সেগুলির আরও বেশি করার অনুমতি দেওয়া উচিত?...
আন্না আমাকে হতবাক করেছিল!.. আমার ছোট মেয়ে কখন সম্পূর্ণরূপে একজন প্রাপ্তবয়স্কের মতো ভাবতে শিখেছিল?.. সত্য, জীবন তার সাথে খুব করুণাময় বা নরম ছিল না, তবে, তবুও, আনা খুব দ্রুত বড় হয়েছিল, যা আমাকে খুশি এবং শঙ্কিত করেছিল একই সময়ে ... আমি আনন্দিত ছিলাম যে প্রতিদিন সে শক্তিশালী হয়ে উঠছে, এবং একই সাথে আমি ভয় পেয়েছিলাম যে খুব শীঘ্রই সে খুব স্বাধীন এবং স্বাধীন হয়ে উঠবে। এবং প্রয়োজনে তাকে কিছু বোঝানো আমার পক্ষে খুব কঠিন হবে। তিনি সর্বদা একজন ঋষি হিসাবে তার "দায়িত্ব" কে খুব গুরুত্ব সহকারে নিয়েছিলেন, জীবন এবং মানুষকে তার সমস্ত হৃদয় দিয়ে ভালোবাসেন এবং খুব গর্বিত বোধ করেন যে একদিন তিনি তাদের সুখী হতে এবং তাদের আত্মাকে আরও পরিষ্কার এবং আরও সুন্দর করতে সাহায্য করতে পারেন।
এবং এখন আন্না প্রথমবারের মতো আসল ইভিলের সাথে দেখা করেছিল... যা নির্দয়ভাবে তার খুব ভঙ্গুর জীবনে বিস্ফোরিত হয়েছিল, তার প্রিয় বাবাকে ধ্বংস করেছিল, আমাকে নিয়ে গিয়েছিল এবং নিজের জন্য একটি ভয়ঙ্কর হয়ে যাওয়ার হুমকি দিয়েছিল... এবং আমি নিশ্চিত ছিলাম না সে কিনা ক্যারাফার হাতে তার পুরো পরিবার মারা গেলে একা সবকিছুর সাথে লড়াই করার যথেষ্ট শক্তি ছিল?
আমাদের জন্য বরাদ্দ করা ঘন্টা খুব দ্রুত কেটে গেল। কারাফা দোরগোড়ায় দাঁড়িয়ে হাসছিল...
আমি ভিতরে আছি শেষবারআমি আমার প্রিয় মেয়েটিকে আমার বুকে জড়িয়ে ধরেছিলাম, জেনেছিলাম যে আমি তাকে এখন খুব বেশিদিন দেখতে পাব না, এবং হয়তো কখনোই... আনা অজানার উদ্দেশ্যে চলে যাচ্ছিল, এবং আমি কেবল আশা করতে পারি যে কারাফা সত্যিই তাকে শেখাতে চেয়েছিল তার পাগল মানুষের লক্ষ্যের জন্য এবং এই ক্ষেত্রে, অন্তত কিছু সময়ের জন্য কিছুই তাকে হুমকি দেয় না। আপাতত সে মেটেওরায় থাকবে।
- আপনি কি কথোপকথন উপভোগ করেছেন, ম্যাডোনা? - ক্যারাফা আন্তরিকভাবে ভণ্ডামি করে জিজ্ঞেস করল।
- আপনাকে ধন্যবাদ, আপনার পবিত্রতা. হ্যাঁ, অবশ্যই। যদিও, আমি আমার মেয়েকে নিজে বড় করতে পছন্দ করব, যেমনটা স্বাভাবিক পৃথিবীতে প্রচলিত, এবং তাকে অজানা লোকের হাতে তুলে দেব না, কারণ তার জন্য আপনার একধরনের পরিকল্পনা আছে। একটি পরিবারের জন্য যথেষ্ট ব্যথা নেই, আপনি কি মনে করেন না?
- আচ্ছা, এটা নির্ভর করে কোনটার উপর, ইসিডোরা! - কারাফা হাসল। - আবার, "পরিবার" এবং পরিবার আছে... এবং আপনার, দুর্ভাগ্যবশত, দ্বিতীয় শ্রেণীর অন্তর্গত... আপনি এত শক্তিশালী এবং মূল্যবান যে আপনার সুযোগের জন্য অর্থ প্রদান না করে এভাবে বেঁচে থাকতে পারেন। মনে রাখবেন, আমার "মহান জাদুকরী," এই জীবনের সবকিছুরই মূল্য আছে, এবং আপনি পছন্দ করেন বা না করেন তা নির্বিশেষে আপনাকে সবকিছুর জন্য মূল্য দিতে হবে... এবং দুর্ভাগ্যবশত, আপনাকে খুব মূল্য দিতে হবে। তবে চলুন আজকে খারাপ বিষয় নিয়ে কথা বলি না! আপনি একটি চমৎকার সময় ছিল, তাই না? পরে দেখা হবে, ম্যাডোনা। আমি আপনাকে কথা দিচ্ছি, এটি খুব শীঘ্রই হবে।
আমি হিম হয়ে গেলাম... এই কথাগুলো আমার কাছে কতটা পরিচিত ছিল!.. এই তিক্ত সত্যটা আমার ছোট্ট জীবনে এত ঘন ঘন আমাকে সঙ্গ দিয়েছে যে আমি বিশ্বাসই করতে পারছিলাম না যে আমি সেগুলি অন্য কারো কাছ থেকে শুনছি!.. সত্যিই তাই ছিল! সত্য যে প্রত্যেককে অর্থ প্রদান করতে হয়েছিল, কিন্তু সবাই স্বেচ্ছায় তা করেনি... এবং কখনও কখনও এই অর্থপ্রদান খুব ব্যয়বহুল ছিল...
স্টেলা অবাক হয়ে আমার মুখের দিকে তাকাল, দৃশ্যত আমার অদ্ভুত বিভ্রান্তি লক্ষ্য করে। কিন্তু আমি অবিলম্বে তাকে দেখিয়েছিলাম যে "সবকিছু ঠিক আছে, সবকিছু ঠিক আছে," এবং ইসিডোরা, যিনি এক মুহুর্তের জন্য চুপ হয়ে গেলেন, তার বাধাগ্রস্ত গল্পটি চালিয়ে যান।
ক্যারাফা চলে গেল, আমার প্রিয় শিশুটিকে নিয়ে গেল। আমাদের চারপাশের পৃথিবীবিবর্ণ, এবং আমার বিধ্বস্ত হৃদয়, ধীরে ধীরে কালো, আশাহীন বিষাদে ভরে গেল। ভবিষ্যৎ অশুভ মনে হলো। তার মধ্যে কোনও আশা ছিল না, কোনও স্বাভাবিক আত্মবিশ্বাস ছিল না যে, এখন যতই কঠিন হোক না কেন, শেষ পর্যন্ত সবকিছুই একরকম কার্যকর হবে এবং সবকিছু অবশ্যই ঠিক হয়ে যাবে।

কলিং প্যানেলের সাথে ইন্টারকম কিনুন।

দক্ষিণ ব্লটিং

সাউদার্ন ব্লটিং পদ্ধতি ব্যবহৃত হয় আণবিক জীববিজ্ঞানএকটি নমুনায় একটি নির্দিষ্ট ডিএনএ ক্রম সনাক্ত করতে। সাউদার্ন ব্লটিং অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরসিসকে ভগ্নাংশ ডিএনএ-এর সাথে একত্রিত করে সংকরকরণের জন্য একটি ঝিল্লি ফিল্টারে দৈর্ঘ্য-বিচ্ছিন্ন ডিএনএ স্থানান্তর করার কৌশল। পদ্ধতিটির নামকরণ করা হয়েছে এর উদ্ভাবক, ইংরেজ জীববিজ্ঞানী এডউইন সাউদার্নের নামে।

অন্যান্য স্থানান্তর প্রযুক্তি, যেমন ওয়েস্টার্ন ব্লটিং, নর্দার্ন ব্লটিং, সাউদার্ন ব্লটিং, অনুরূপ পদ্ধতি ব্যবহার করে, কিন্তু একটি নমুনায় আরএনএ বা প্রোটিন শনাক্ত করতে, এবং সাউদার্ন দ্বারা উদ্ভাবিত পদ্ধতির নামানুসারে নামকরণ করা হয়। যেহেতু সাউদার্ন ব্লট বিজ্ঞানীর নামে নামকরণ করা হয়েছে, তাই শব্দটি বড় হাতের অক্ষর দিয়ে লেখা হয়েছে, যখন পশ্চিমী ব্লট এবং নর্দার্ন ব্লট ছোট হাতের অক্ষর দিয়ে লেখা হয়েছে।

পদ্ধতি

1. নিষেধাজ্ঞা এন্ডোনিউক্লিস উচ্চ আণবিক ওজনের ডিএনএকে ছোট ছোট টুকরোতে কেটে দেয়।
2. ডিএনএ খণ্ডগুলি দৈর্ঘ্য বিভাজনের জন্য একটি অ্যাগারোজ জেলে ইলেক্ট্রোফোরসড হয়।
3. যদি কিছু ডিএনএ খণ্ড 15 kb এর বেশি হয়, জেলটি স্থানান্তরের আগে প্রক্রিয়া করা হয়, যেমন হাইড্রোক্লোরিক অ্যাসিড, যা ডিএনএ-র বিশুদ্ধকরণ ঘটায় এবং ঝিল্লিতে স্থানান্তরকে সহজ করে।
4. ক্ষারীয় স্থানান্তর পদ্ধতি ব্যবহার করার সময়, অ্যাগারোজ জেলটি স্থাপন করা হয় ক্ষারীয় সমাধান, যখন ডিএনএ ডাবল হেলিক্স ডিনেচার করে এবং আরও হাইব্রিডাইজেশনের জন্য একটি ইতিবাচক চার্জযুক্ত ঝিল্লির সাথে নেতিবাচক চার্জযুক্ত ডিএনএকে আবদ্ধ করতে সহায়তা করে। একই সময়ে, অবশিষ্ট আরএনএও ধ্বংস হয়ে যায়।
5. অ্যাগারোজ জেলের উপরে বা নীচে নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লির একটি শীট স্থাপন করা হয়। চাপ সরাসরি জেলে বা কাগজের বিভিন্ন স্তরের মাধ্যমে প্রয়োগ করা হয়। সফল স্থানান্তরের জন্য, জেল এবং ঝিল্লির মধ্যে আঁটসাঁট যোগাযোগ প্রয়োজন। বাফারটি কৈশিক বাহিনী দ্বারা উচ্চ জলের কন্টেন্ট এলাকা থেকে কম জলের কন্টেন্ট এলাকায় পরিবহন করা হয়। এতে জেল থেকে ঝিল্লিতে ডিএনএ স্থানান্তর করা হয়। পলিনিওনিক ডিএনএ আয়ন বিনিময় মিথস্ক্রিয়া মাধ্যমে ধনাত্মক চার্জযুক্ত ঝিল্লির সাথে আবদ্ধ হয়।
6. শেষ পর্যন্ত ঝিল্লিতে ডিএনএ ঠিক করার জন্য, পরবর্তীটিকে শূন্যে 80 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় দুই ঘণ্টার জন্য উত্তপ্ত করা হয় বা অতিবেগুনী বিকিরণের মাধ্যমে আলোকিত করা হয়।
7. একটি পরিচিত ডিএনএ ক্রম সহ একটি তেজস্ক্রিয়ভাবে লেবেলযুক্ত নমুনার সংকরকরণ ঝিল্লির সাথে বাহিত হয়।
8. হাইব্রিডাইজেশনের পরে, ঝিল্লি থেকে অতিরিক্ত নমুনা ধুয়ে ফেলা হয় এবং হাইব্রিডাইজেশন পণ্যগুলি অটোরেডিওগ্রাফি দ্বারা কল্পনা করা হয় বা ঝিল্লির রঙ মূল্যায়ন করা হয়।

রিপোর্টার জিন

একটি নির্দিষ্ট জিন কোষ বা টিস্যুর নমুনায় উপস্থিত ডিএনএ বা আরএনএ অণুর অন্যান্য অংশগুলির মধ্যে সেই জিনের সাথে সম্পর্কিত ডিএনএ বা আরএনএ অণুর নির্দিষ্ট অংশগুলিকে আলাদা করার ক্ষমতা জড়িত। যখন জিনোমিক ডিএনএ বিশ্লেষণ করা হয়, তখন চ্যালেঞ্জ হল সীমাবদ্ধতা এনজাইমগুলির সাথে জিনোমিক ডিএনএ হজমের মাধ্যমে প্রাপ্ত কয়েক মিলিয়ন টুকরো সমন্বিত একটি জটিল মিশ্রণে আগ্রহের নির্দিষ্ট ডিএনএ খণ্ডটি সনাক্ত করা এবং অধ্যয়ন করা। আরএনএ নমুনার সাহায্যে, একটি টিস্যুর মোট আরএনএতে এমআরএনএর একটি নির্দিষ্ট কপির আয়তন এবং গুণমান সনাক্ত করা এবং পরিমাপ করা চ্যালেঞ্জ যেখানে লক্ষ্য এমআরএনএ 1000-এর মধ্যে 1-এর কম। মোট সংখ্যাআরএনএ কপি।

সমাধান সমস্যাঅন্য অনেকের মধ্যে একটি বিরল ক্রম শনাক্ত করার জন্য ডিএনএ বা আরএনএ অণুগুলিকে আকার অনুসারে আলাদা করতে জেল ইলেক্ট্রোফোরসিস ব্যবহার করা হয়, তারপরে একটি নিউক্লিওটাইড প্রোবের সাহায্যে সংকরায়ন করা হয় যা আগ্রহের অণুকে চিহ্নিত করে।

দক্ষিণী ব্লটিং কৌশল(সাউদার্ন ব্লটিং) আপনাকে সীমাবদ্ধতা এনজাইমগুলির সাথে ডিএনএ প্রক্রিয়াকরণের পরে প্রাপ্ত প্রায় এক মিলিয়ন টুকরোগুলির একটি আপাতদৃষ্টিতে তথ্যহীন সংগ্রহের আগ্রহের অনেক অংশকে রুক্ষ স্তরে সনাক্ত এবং অধ্যয়ন করতে দেয়। সাউদার্ন ব্লটিং, 1970-এর দশকের মাঝামাঝি সময়ে বিকশিত, ডিএনএ-এর নির্দিষ্ট অংশগুলি পরীক্ষা করার জন্য একটি আদর্শ পদ্ধতি হয়ে উঠেছে যা সীমাবদ্ধ এনজাইম দ্বারা পরিপাক করা হয়েছে। এই পদ্ধতিতে প্রথমে একটি উপলব্ধ উৎস থেকে ডিএনএ বের করা জড়িত। শরীরের যেকোন কোষকে ডিএনএর উৎস হিসেবে ব্যবহার করা যেতে পারে, পরিপক্ক লোহিত রক্তকণিকা বাদে যার নিউক্লিয়াস নেই।

নমুনা বিশ্লেষণের সময় ডিএনএরোগী সাধারণত নিয়মিত শিরা পাংচারের মাধ্যমে প্রাপ্ত লিম্ফোসাইটের জিনোমিক ডিএনএ ব্যবহার করে। 10 মিলি পেরিফেরাল রক্তে আনুমানিক 108 লিউকোসাইট বা প্রায় 100 মাইক্রোগ্রাম ডিএনএ থাকে - সীমাবদ্ধ এনজাইম দ্বারা হজমের জন্য যথেষ্ট ডোজ। জিনোমিক ডিএনএ অন্যান্য টিস্যু থেকেও পাওয়া যেতে পারে, যার মধ্যে রয়েছে কালচারড স্কিন ফাইব্রোব্লাস্ট, অ্যামনিওটিক সেল বা কোরিওনিক ভিলি, যা জন্মপূর্ব রোগ নির্ণয়ের জন্য ব্যবহৃত হয়, অথবা বিভিন্ন অঙ্গের টিস্যুর বায়োপসি নমুনা থেকে (যেমন, লিভার, কিডনি, প্লাসেন্টা)।

লক্ষ লক্ষ বিভিন্ন টুকরো দিয়ে চেষ্টা করা হচ্ছে ডিএনএ, সীমাবদ্ধ এনজাইম সহ একটি জিনোমিক ডিএনএ নমুনার এনজাইম্যাটিক হজম দ্বারা উত্পন্ন, প্রারম্ভিক বিন্দুতে একটি অ্যাগারোজ জেলের পৃষ্ঠে প্রয়োগ করা হয়। ডিএনএ খণ্ডগুলিকে অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করে আকার অনুসারে আলাদা করা হয়, যেখানে ছোট কণাগুলি বৈদ্যুতিক ক্ষেত্রে বড়গুলির চেয়ে দ্রুত গতিতে চলে। যখন আগ্রহের ডিএনএ, এইভাবে আলাদা করা হয়, ইথিডিয়াম ব্রোমাইডের মতো ফ্লুরোসেন্ট রঞ্জক দিয়ে দাগ দেওয়া হয়, তখন ডিএনএ খণ্ডগুলি জেলের গলি বরাবর ফ্লুরোসেন্ট অঞ্চল হিসাবে প্রদর্শিত হয়, উপরে ছোট টুকরা, নীচে বড়গুলি। ডিএনএ জেলের মধ্যে বিচ্ছিন্ন ব্যান্ডের পরিবর্তে একটি স্মিয়ার হিসাবে প্রদর্শিত হয় কারণ সাধারণত একটি থেকে অন্যটিকে আলাদা করার জন্য অনেকগুলি ভিন্ন আকারের ডিএনএ টুকরা থাকে।

ডবল স্ট্র্যান্ডেড টুকরা স্পট ডিএনএপ্রথমে ডিএনএ স্ট্র্যান্ডগুলিকে আলাদা করার জন্য একটি শক্তিশালী ক্ষার দিয়ে বিকৃত করা হয়েছিল। ফলে একক-স্ট্রেন্ডেড ডিএনএ অণুগুলি জেল থেকে ছিদ্রযুক্ত কাগজের ফিল্টারে স্থানান্তরিত হয় (তাই পদ্ধতির দ্বিতীয় নাম - "দক্ষিণ স্থানান্তর")।

জন্য সনাক্তকরণলক্ষ লক্ষ অন্যদের মধ্যে আগ্রহের এক বা একাধিক টুকরো, ফিল্টারটি একটি পরিপূরক একক-স্ট্র্যান্ডেড লেবেলযুক্ত প্রোবের সাথে ইনকিউবেট করা হয় এমন পরিস্থিতিতে যা দ্বিগুণ ডিএনএ অণুগুলির জোড়াকে উন্নীত করে। আনবাউন্ড প্রোবগুলি ধোয়ার মাধ্যমে মুছে ফেলা হয়, তারপরে আবদ্ধ তেজস্ক্রিয় প্রোব সহ ফিল্টারটি ফটোগ্রাফিক ফিল্মের সংস্পর্শে আসে, যা প্রোবটি সংযুক্ত করা এক বা একাধিক খণ্ডের অবস্থান প্রকাশ করে। এইভাবে, আসল জেলের প্রতি আগ্রহের প্রতিটি মানুষের ডিএনএ খণ্ডের জন্য নির্দিষ্ট তেজস্ক্রিয় ব্যান্ডগুলি ফিল্মটিতে দেখা যেতে পারে।

ক্ষমতা দক্ষিণী দাগমিউটেশনের শনাক্তকরণ সীমিত কারণ প্রোবগুলি কেবলমাত্র সেই ত্রুটিগুলি সনাক্ত করতে পারে যা সীমাবদ্ধ অংশের আকারের উপর পরিমাপযোগ্য প্রভাব ফেলে, যেমন বড় মুছে ফেলা বা সন্নিবেশ করানো। একটি মিউটেশন যা এক বা একাধিক ঘাঁটি পরিবর্তন করে তা সনাক্ত করা যায় না যদি না এটি একটি সীমাবদ্ধ এনজাইম সনাক্তকরণ সাইট তৈরি বা ধ্বংস না করে, যার ফলে প্রোবের দ্বারা শনাক্ত করা টুকরোটির আকারে উল্লেখযোগ্য পরিবর্তন হয়। যাইহোক, একটি জিনের এক বা একাধিক বেস জোড়াকে প্রভাবিত করে এমন মিউটেশন সনাক্ত করার জন্য সাউদার্ন ব্লটিং ছাড়া অনেক পদ্ধতি রয়েছে।

একবার ডিএনএ, আরএনএ বা প্রোটিন আলাদা হয়ে গেলে, তাদের সনাক্তকরণ এবং অন্যান্য অপারেশনের জন্য একটি শক্ত সমর্থনে স্থানান্তর করতে হবে যা জেলে করা কঠিন। স্থানান্তর প্রক্রিয়া নেতৃস্থানীয় অণুর স্থিরকরণ , অর্থাৎ একটি স্থির অবস্থায় স্থির বলা হয় blotting (ইংরেজিতে- blotting ) নাইলন বা নাইট্রোসেলুলোজ ঝিল্লি একটি সাবস্ট্রেট হিসাবে ব্যবহৃত হয়।

ব্লটিং(ইংরেজি ব্লটিং থেকে - ব্লটিং) হল ইলেক্ট্রোফোরেটিক ডিএনএ টুকরাগুলিকে নাইট্রোসেলুলোজ দিয়ে তৈরি একটি বিশেষ ফিল্মে (ঝিল্লি) স্থানান্তর করার একটি পদ্ধতি যা একক-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ অণুকে আবদ্ধ করে (অচল করে)।

দক্ষিণ ব্লটিং(লেখকের নামের পরে যিনি এটি প্রস্তাব করেছিলেন) কৈশিক প্রভাবের কারণে ডিএনএ খণ্ডগুলির গতিবিধির উপর ভিত্তি করে। ফিল্টার পেপার ব্যবহার করে অ্যাগারোজ জেলে থাকা ডিএনএ খণ্ডগুলিকে নাইট্রোসেলুলোজ ফিল্মে স্থানান্তর করার প্রক্রিয়াটি ব্লটিং এর মতো।

বিশ্লেষণটি নিম্নরূপ বাহিত হয়:

- বিচ্ছিন্ন, বিশুদ্ধ, বিকৃত এবং খণ্ডিত ডিএনএ অ্যাগারোজ জেলের একটি শীটে স্থাপন করা হয়, যেখানে খণ্ডগুলি ইলেক্ট্রোফোরেটিক্যালি ভর এবং চার্জ দ্বারা পৃথক করা হয়।

– অ্যাগারোজ জেলের একটি শীট ঘনীভূত স্যালাইন (বাফার) দ্রবণে ভেজা ফিল্টার পেপারে স্থাপন করা হয়।

- তারপরে একটি নাইট্রোসেলুলোজ ফিল্টার জেলে প্রয়োগ করা হয়, যেখানে একক-অবস্থিত ডিএনএ টুকরোগুলির অস্থিরতা (বা শোষণ বা ফিক্সেশন) ঘটে।

- শুকনো ফিল্টার পেপারের শীটগুলির একটি স্তুপ ফিল্টারের উপরে স্থাপন করা হয়, যা জেলের মাধ্যমে বাফার দ্রবণের একটি ধীর প্রবাহ নিশ্চিত করে (অর্থাৎ, এক ধরণের কৈশিক পাম্প হিসাবে কাজ করে)। লবণাক্ত সমাধান, একটি অ্যাগারোজ জেলের মধ্য দিয়ে যাওয়ার সময়, এটির সাথে ডিএনএ টুকরা বহন করে যা নাইট্রোসেলুলোজ দ্বারা ধরে রাখে এবং এটির সাথে আবদ্ধ হয় এবং দ্রবণটি শুকনো ফিল্টার পেপার দ্বারা শোষিত হয়।

– এরপরে, ডিএনএকে ক্ষার দিয়ে বিকৃত করা হয় এবং ফিল্টারটিকে 80 0 সেন্টিগ্রেড তাপমাত্রায় একটি ভ্যাকুয়ামে রাখা হয়, যার ফলস্বরূপ একক-স্ট্রেন্ডেড ডিএনএ খণ্ডগুলি নাইট্রোসেলুলোসে অপরিবর্তনীয়ভাবে স্থির (স্থির) হয়। এই ক্ষেত্রে, স্থির ডিএনএ ব্যান্ডগুলির অবস্থান জেলে তাদের অবস্থানের সাথে হুবহু মিলে যায়।

– ফিল্টারের সাথে আবদ্ধ ডিএনএ একটি ডিএনএ-লেবেলযুক্ত প্রোবের সাথে একটি দ্রবণে স্থাপন করা হয়, যেখানে সংকরকরণ ঘটে। হাইব্রিডাইজ (ফর্ম হাইড্রোজেন বন্ড) একটি নির্দিষ্ট প্রোবের সাথে কেবলমাত্র এটির পরিপূরক ডিএনএ টুকরা থাকবে, যা এক্স-রে ফিল্মের হালকা স্ট্রাইপের আকারে সনাক্ত করা যেতে পারে, যেমন নাইট্রোসেলুলোজ ফিল্টারের অটোরেডিওগ্রাফি

ডট ব্লট. ডট ব্লট প্রস্তুত করতে, একটি ডিএনএ বা আরএনএ প্রস্তুতি সরাসরি ফিল্টারে প্রয়োগ করা হয়। ওষুধের ফোঁটাগুলি ফিল্টারে বিন্দুর মতো দেখায়, যা ব্লটিং ধরণের নাম (ইংরেজি ডট) ব্যাখ্যা করে। 1) জিনোমিক ডিএনএ থেকে আল্ট্রাসাউন্ডের মাধ্যমে প্রাক-চিকিত্সা করা হয়, 5-10 টি নিউক্লিওটাইড জোড়া লম্বা টুকরো তৈরি হয়।

2) ডিএনএ বা আরএনএ প্রোবগুলিকে প্রোবের কাছে অ্যাক্সেসযোগ্য করতে, তাদের বিকৃত করা দরকার, যেমন একক-চেইন ফর্মে রূপান্তর করুন। এটি 100 ডিগ্রি সেলসিয়াসের তাপমাত্রার প্রভাবে ঘটে।

3) বিকৃত নিউক্লিক অ্যাসিডগুলি বরফের উপর সঞ্চিত হয়: তাপমাত্রার দ্রুত হ্রাস তাদের পুনর্নবীকরণকে বাধা দেয়, যেমন চেইনের পরিপূরক জোড়া। বিকৃত ডিএনএ বা আরএনএ সরাসরি ফিল্টারে প্রয়োগ করা হয়, যা প্রোব ধারণকারী একটি দ্রবণে ইনকিউবেট করা হয়।

4) বিশ্লেষিত নিউক্লিক অ্যাসিডকে দ্রবণে যেতে বাধা দিতে, এটি একটি ফিল্টারে (ঝিল্লি) স্থির করতে হবে। এর জন্য, দুটি ধরণের ফিল্টার ব্যবহার করা হয়: নাইট্রোসেলুলোজ এবং নাইলন।

অস্থিরকরণের জন্য নিউক্লিক অ্যাসিডনাইট্রোসেলুলোজ ফিল্টারে, ভ্যাকুয়ামে 80 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ভাজা ব্যবহার করা হয় এবং নাইলন ফিল্টারে 3-5 মিনিটের জন্য UV বিকিরণ ব্যবহার করা হয়।

5) একটি আইসোটোপ-লেবেলযুক্ত প্রোবের সাহায্যে নিউক্লিক অ্যাসিড প্রস্তুতির ইনকিউবেশনের পরে, অ-তেজস্ক্রিয় পদ্ধতি ব্যবহার করে একটি বিশেষ ক্যাসেট বা সনাক্তকরণে অটোরাডিওগ্রাফি করা হয়।

ডট ব্লটিং আপনাকে শুধুমাত্র একটি প্রশ্নের উত্তর দিতে দেয়: প্রদত্ত নমুনায় পছন্দসই নিউক্লিওটাইড ক্রম উপস্থিত আছে কিনা।

উত্তর দাগ বিশ্লেষণপ্রযোজ্য:

1) আরএনএ বিচ্ছিন্ন করা এবং বিশ্লেষণ করা (উদাহরণস্বরূপ, প্রদত্ত জিন থেকে পড়া mRNA একটি প্রদত্ত কোষের প্রকারে উপস্থিত রয়েছে কিনা তা নির্ধারণ করতে, যেমন জিনটি প্রকাশ করা হয়েছে কিনা;

2) এই আরএনএর পরিমাণ এবং প্রদত্ত কোষের প্রকারের বিকাশে এর পরিবর্তনগুলি নির্ধারণ করতে;

3) একটি জিনের প্রতিলিপির আকার নির্ধারণ করতে।

এই ক্ষেত্রে, কোষ থেকে বিচ্ছিন্ন আরএনএ অণুগুলি জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করে আকার দ্বারা পৃথক করা হয় এবং তারপর একটি ফিল্টারে স্থানান্তরিত হয়। লেবেলযুক্ত সিঙ্গেল-স্ট্র্যান্ডেড প্রোবের সাথে হাইব্রিডাইজেশনের পরে, আরএনএ এবং প্রোবের হাইব্রিডাইজেশন (হোমোলজি) সাইটগুলি চিহ্নিত করা হয়।

যদি কাঙ্ক্ষিত জিনের (বা mRNA) নিউক্লিওটাইড ক্রম জানা না থাকে, কিন্তু যে প্রোটিনটির সংশ্লেষণ এটি নিয়ন্ত্রণ করে তা জানা যায়, তাহলে অল্প পরিমাণ বিশুদ্ধ প্রোটিনকে বিচ্ছিন্ন করা এবং এর কিছু অ্যামিনো অ্যাসিডের ক্রম নির্ধারণ করা সম্ভব (জ্ঞান 5-6 অ্যামিনো অ্যাসিডের অবশিষ্টাংশ যথেষ্ট)। টেবিল ব্যবহার করে জেনেটিক কোড, এমআরএনএ (বা নিজেই জিন) বিভাগে সমস্ত সম্ভাব্য নিউক্লিওটাইড ক্রম স্থাপন করা সম্ভব যা একটি প্রদত্ত অ্যামিনো অ্যাসিড ক্রম এনকোড করে। এই ক্ষেত্রে, একটি জিন লাইব্রেরিতে পছন্দসই ক্লোনগুলি অনুসন্ধান করার জন্য একটি প্রোব সংশ্লেষিত করা যেতে পারে।

ওয়েস্টার্ন ব্লটিনজি(ইমিউনোইলেক্ট্রব্লটিং, প্রোটিন ব্লটিং) অনন্য প্রোটিন সনাক্ত করার একটি পদ্ধতি। এটি অত্যন্ত নির্দিষ্ট অ্যান্টিজেন-অ্যান্টিবডি মিথস্ক্রিয়া ঘটনার উপর ভিত্তি করে। এইভাবে, অ্যান্টিজেন (লক্ষ্য) হল প্রোটিন নির্ধারণ করা হচ্ছে, এবং প্রোব হল এটির অ্যান্টিবডি।

অধ্যয়নের অধীনে প্রোটিনের অ্যান্টিবডি প্রাপ্ত হয় বিভিন্ন উপায়ে. সবচেয়ে সহজ হল একটি পরীক্ষাগার প্রাণীর (সাধারণত একটি খরগোশ) রক্ত ​​​​প্রবাহে একটি বিশুদ্ধ প্রোটিন নমুনা ইনজেকশন করা। তার শরীর এই বিদেশী প্রোটিনের জন্য অ্যান্টিবডি (ইমিউনোগ্লোবুলিন) তৈরি করে। এগুলি প্রাথমিক অ্যান্টিবডি যা লক্ষ্য প্রোটিনের সাথে যোগাযোগ করবে।

যাইহোক, অ্যান্টিবডি ডেটাতে সরাসরি একটি শনাক্তকরণ লেবেল প্রবর্তন করা ব্যবহারিক হবে না। বিভিন্ন প্রোটিন শনাক্ত করার জন্য বিভিন্ন অ্যান্টিবডির লেবেল লাগাতে হবে, যার ফলে ভিন্ন উচ্চ খরচ. এটি ব্যবহার করা আরও যুক্তিসঙ্গত বলে প্রমাণিত হয়েছে সার্বজনীন অ্যান্টিবডি – সংযোজিত অ্যান্টিইমিউনোগ্লোবুলিন, যা মূলত অ্যান্টিজেন হিসাবে চিহ্নিত প্রোটিন ব্যবহার করে উত্পাদিত অ্যান্টিবডিগুলির অ্যান্টিবডি। উদাহরণ স্বরূপ, খরগোশের আইজি-তে সংযোজিত অ্যান্টি-ইমিউনোগ্লোবুলিনগুলি খরগোশের মধ্যে সংশ্লেষিত সমস্ত ইমিউনোগ্লোবুলিন বিভিন্ন অ্যান্টিজেনের সাথে যোগাযোগ করবে। সুতরাং, এটি অবিকল এমন সর্বজনীন সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি যা একটি আইসোটোপিক বা অ-তেজস্ক্রিয় লেবেল বহন করে। একটি অ-আইসোটোপিক লেবেল ছাড়াও, যা অনেকগুলি প্রতিক্রিয়ার সময় একটি অদ্রবণীয় রঙিন যৌগ গঠনের দিকে পরিচালিত করে (নিউক্লিক অ্যাসিড ব্লটিং এর ক্ষেত্রে), একটি কেমিলুমিনেসেন্ট লেবেল, যার উচ্চ সংবেদনশীলতা রয়েছে প্রায়ই ব্যবহার করা হয়।

1) হোমোজেনেট থেকে প্রোটিন নিষ্কাশন

2) SDS-polyacrylamide জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস (PAGE) ব্যবহার করে আণবিক ওজন দ্বারা প্রোটিন পৃথক করা। এসডিএস ইলেক্ট্রোফোরেসিস পদ্ধতিতে নেটিভ প্রোটিনের বিকৃতকরণ জড়িত। এইভাবে, প্রোটিন অণু যে একই আছে আণবিক ওজন, জেলে একই পথ ভ্রমণ করবে এবং একটি ফালা আকারে লাইন আপ করবে। যেহেতু মিশ্রণটিতে বিভিন্ন আকারের প্রোটিন অণু রয়েছে, তাই অনেকগুলি ব্যান্ড গঠিত হয়। ইলেক্ট্রোফোরেসিস ফলাফল প্রোটিন স্টেনিং (Coomassie ব্রিলিয়ান্ট ব্লু, অ্যামিডো ব্ল্যাক, সিলভার স্টেনিং) দ্বারা কল্পনা করা যেতে পারে। সিলভার স্টেনিংয়ের একটি অনন্য সংবেদনশীলতা রয়েছে যা ফলস্বরূপ ব্যান্ডে 0.1 এনজি প্রোটিন সনাক্ত করতে দেয়। জেলে প্রয়োগ করা প্রোটিনের পরিমাণ নিয়ন্ত্রণ করার জন্য এটি খুবই গুরুত্বপূর্ণ।

3) জেল থেকে ঝিল্লিতে প্রোটিন স্থানান্তর। এটি করা হয় কারণ পলিঅ্যাক্রিলামাইড বৃহৎ ইমিউনোগ্লোবুলিন অণুকে প্রোটিনে ছড়িয়ে পড়তে দেয় না। এবং ঝিল্লিতে স্থির থাকা প্রোটিন অ্যান্টিবডিগুলিতে অ্যাক্সেসযোগ্য হয়ে ওঠে। নিউক্লিক অ্যাসিড ব্লটিং থেকে ভিন্ন, ঝিল্লিতে প্রোটিন স্থানান্তর বৈদ্যুতিক শক্তির প্রভাবে ঘটে, যেমন একটি বৈদ্যুতিক ক্ষেত্রে।

4) ফলস্বরূপ দাগটি অ্যান্টিসিরাম দিয়ে প্রোটিনের সাথে এবং তারপরে অ্যান্টিইমিউনোগ্লোবুলিন দিয়ে ইনকিউব করা হয়। ফলাফলটি ব্যবহৃত লেবেলের ধরন অনুসারে কল্পনা করা হয়।

বিধিনিষেধ:

1) অধ্যয়নের অধীনে খণ্ডগুলির বড় আকার, উল্লেখযোগ্যভাবে ডিএনএ প্রোবের দৈর্ঘ্য অতিক্রম করে এবং সরাসরি আণবিক বিশ্লেষণ প্রতিরোধ করে;

2) অধ্যয়নকৃত ক্রমগুলির প্রান্তগুলি নির্বিচারে বেছে নেওয়ার অসম্ভবতা, মূল ডিএনএ অণুতে সংশ্লিষ্ট সীমাবদ্ধতার সাইটগুলির উপস্থিতি দ্বারা নির্ধারিত;

3) প্রচুর পরিমাণে ভাল-বিশুদ্ধ উচ্চ আণবিক ওজন জিনোমিক ডিএনএ (প্রতি প্রতিক্রিয়ায় কমপক্ষে 10 μg, যা 0.5-1 মিলি রক্তের সমতুল্য) প্রয়োজন,

4) জিনোমিক হাইব্রিডাইজেশনের জন্য - কমপক্ষে 109 ডাল/মিনিট * µg এর উচ্চ নির্দিষ্ট কার্যকলাপ সহ তেজস্ক্রিয় ডিএনএ প্রোবের উপস্থিতি, সীমিত সময়ের জন্য কাজ করে এবং একটি বিশেষভাবে সজ্জিত আইসোটোপ ইউনিট। উপরন্তু, অটোগ্রাফের দীর্ঘায়িত এক্সপোজার উল্লেখযোগ্যভাবে ফলাফল প্রাপ্ত করার সময় দীর্ঘায়িত করে।

5) উচ্চ শ্রম তীব্রতা গবেষণা